紫外可見分光光度計的日常校準與驗證是確保數(shù)據(jù)準確性的關鍵,主要包括波長校準、吸光度校準、基線校準及性能驗證,具體方法如下:
一、波長校準
使用標準燈:利用汞燈或氘燈的特征發(fā)射譜線(如汞燈的253.7nm、365nm)進行校準。將儀器設定在特定波長,放置校準燈,調(diào)整光路使其通過樣品池,觀察吸收峰并記錄實際波長值,與標準波長對比,偏差超通過儀器內(nèi)置功能或手動調(diào)節(jié)光柵修正。
使用標準濾光片:采用Ho³?摻雜玻璃濾光片,掃描其特征吸收峰(如418nm、450nm),修正波長示值。該方法無需復雜光源切換,但需定期更換濾光片(建議每年1次)。
二、吸光度校準
透射比標準溶液法:
可見區(qū):使用硫酸銅溶液(CuSO?·5H?O,λ=640nm,A=0.5)。
紫外區(qū):使用重鉻酸鉀溶液(K?Cr?O?,λ=350nm,A=0.5)。
配制要求:使用分析純試劑與一級容量瓶,溶液保質(zhì)期不超過7天。采用1cm石英比色皿,以空氣為參比,測量前需用參比液潤洗樣品池3次。要求連續(xù)3次測量RSD≤0.3%,否則需重新裝液。
中性濾光片法:當吸光度>1.5AU時,引入中性濾光片組合(如OD=0.5+1.0疊加),通過多點擬合修正Beer定律偏離。
三、基線校準
使用空白溶劑(如蒸餾水)作為參比,測量其吸光度。調(diào)整儀器的基線調(diào)節(jié)裝置,使空白溶劑的吸光度值為零。重復測量幾次,確?;€穩(wěn)定。
四、性能驗證
精度驗證:準備一系列不同濃度的標準溶液,分別測量每個標準溶液的吸光度,計算其平均值和標準偏差,評估儀器的精度。
重復性驗證:使用同一標準溶液,連續(xù)測量多次,計算每次測量的吸光度值,求其平均值和標準偏差,評估儀器的重復性。
線性驗證:準備一系列不同濃度的標準溶液,分別測量每個標準溶液的吸光度,繪制吸光度-濃度曲線,計算曲線的線性相關系數(shù),評估儀器的線性。